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細(xì)胞流式檢測準(zhǔn)備(直接標(biāo)記一抗)
發(fā)表者:北京博奧森生物      發(fā)表時(shí)間:2016-2-15
熒光素直接標(biāo)記的一抗(直接免疫熒光法) 試劑準(zhǔn)備: 1.準(zhǔn)備熒光標(biāo)記的一抗和同型對照抗體 2.細(xì)胞洗液:含有2%BSA(牛血清白蛋白)、0.1%疊氮鈉的PBS. 3.固定液:1%多聚甲醛PBS液(pH7.2)pH值一定要準(zhǔn)確,否則會影響檢測結(jié)果。 操作方法: 1.每個(gè)樣品取2支流式檢測管,分別注明同型對照和待測,兩管分別加入106-7/100μl個(gè)待側(cè)細(xì)胞(若細(xì)胞濃度低或加入的細(xì)胞懸液較多,可1200轉(zhuǎn)/每分鐘,10分鐘低溫離心,棄上清,保證100μl被檢樣品)。 2.同型對照管中加入熒光標(biāo)記同型對照抗體,做陰性對照;待測管中加入熒光標(biāo)記的一抗,作為實(shí)驗(yàn)管,各加30μl (按抗體使用說明書,一抗可做選擇幾個(gè)梯度1:20、50、100倍稀釋)混勻即可。 3. 4℃度孵育30分鐘,加入細(xì)胞洗液,1200轉(zhuǎn)/每分鐘,10分鐘低溫離心,反復(fù)2次。 4.去除上清,控干,加入固定液0.5ml,混勻。 5.上機(jī)檢測,先做同型對照,調(diào)整電壓至陰性區(qū)范圍,再測實(shí)驗(yàn)管即可。
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