內(nèi)參抗體可用于評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blot)的效率，比較凝膠中每孔的蛋白上樣量。此類對照可幫助確定樣品間表達(dá)水平的差異，以判斷是由細(xì)胞裂解物的實(shí)際蛋白水平導(dǎo)致，還是由上樣量的差異導(dǎo)致。
內(nèi)參抗體在目標(biāo)蛋白的免疫熒光研究中，也可以作為共染的陽性對照。內(nèi)參抗體分為未標(biāo)記型和標(biāo)記型，標(biāo)記物包括生物素、HRP、FITC、PE、Cy染料和Alexa Fluor染料。
內(nèi)參抗體種類很多，比如β-actin、β-tubunlin、GAPDH、Vinculin、Lamin B、PCNA等，其選擇常使我們困惑。本文將簡單介紹選擇內(nèi)參抗體應(yīng)遵循的五項(xiàng)原則：
一、樣本種屬來源：
首先要考慮實(shí)驗(yàn)樣本來源于什么物種。
1. 哺乳動(dòng)物的組織或者細(xì)胞樣本，通常選擇β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Histone H3、Na,Katpase等。
2. 植物來源實(shí)驗(yàn)樣本，則可以選擇plant actin、Rubisco等。
3. 其他來源樣本研究較少，所以就應(yīng)該參照文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，選擇合適的蛋白作為內(nèi)參。
二、分子量大?。?/span>
選擇內(nèi)參抗體時(shí)，應(yīng)該考慮目的蛋白分子量的大小，一般保證目的蛋白與內(nèi)參蛋白分子量相差5KD以上。例如，目的蛋白分子量為40KD，此時(shí)不適宜選擇β-actin、與GAPDH作為內(nèi)參，可以考慮選擇α-Tubulin或者β-tubulin作為內(nèi)參。三、表達(dá)水平：
選擇的內(nèi)參蛋白需要在待測樣本中是高表達(dá)的。常用的內(nèi)參蛋白是由管家基因高表達(dá)的，是細(xì)胞發(fā)育和維持細(xì)胞活力所必須的。例如，細(xì)胞核的內(nèi)參蛋白 PCNA，在 DNA S 期表達(dá)，因此對于非增殖細(xì)胞不推薦使用。四、目的蛋白表達(dá)定位：
| 適用范圍 | 名稱 | 貨號(hào) | 分子量 |
|
胞質(zhì) |
beta I Tubulin | bsm-33041M | 50kDa |
| beta Tubulin | bsm-33034M | 50kDa | |
| bs-4511R | 50kDa | ||
| beta Actin | bsm-33036M | 42kDa | |
| bs-0061R | 42kDa | ||
| GAPDH | bs-10900R | 36kDa | |
| bs-2188R | 36kDa | ||
| bsm-0978M | 36kDa | ||
| bsm-33033M | 36kDa | ||
|
alpha Tubunlin |
bs-20496R | 50kDa | |
| bs-0159R | 50kDa | ||
| Vinculin | bsm-54148R | 117kDa | |
| Cyclophilin B | bsm-33228M | 20kDa | |
| bsm-52473R | 20kDa | ||
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核蛋白 |
Histone H3 | bs-0349R | 15-17kDa |
| bsm-33042M | 15-17kDa | ||
| Lamin B | bs-23709R | 66-72kDa | |
| bsm-33040M | 66-72kDa | ||
| PCNA | bs-0754R | 36kDa | |
| bsm-52347R | 36kDa | ||
| bsm-33035M | 36kDa | ||
| TATA binding protein TBP/TBP | bsm-33227M | 38kDa | |
| YY1 | bsm-52349R | 46kDa | |
| HDAC1 | bs-1414R | 65kDa | |
| bsm-52080R | 65kDa | ||
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膜蛋白 |
ATPase Na+/ K+ beta 2 (ATPB2) | bs-1152R | 33kDa |
| bs-23414R | 33kDa | ||
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質(zhì)膜 |
ATP1A1 (Sodium Potassium ATPase) | bs-4255R | 97-110kDa |
| bsm-52485R | 97-110kDa | ||
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線粒體 |
COX4 | bsm-33037M | 17kDa |
| VDAC1 | bs-1461R | 32kDa | |
| bsm-52251R | 32kDa | ||
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全血/血漿/血清 |
Transferrin | bsm-33243M | 77kDa |
| bs-2052R | 77kDa | ||
| Albumin | bsm-0945M | 66kDa | |
| bs-0945R | 66kDa | ||
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細(xì)胞增殖標(biāo)志物 |
BrdU | bsm-0917M | 化合物 |
| bs-0489R | 化合物 | ||
| 植物內(nèi)參 | Plant actin | bsm-33128M | 42kDa |
五、表達(dá)因素：
選擇蛋白表達(dá)不受實(shí)驗(yàn)變量影響的內(nèi)參。
●在做多組織多細(xì)胞樣本對比表達(dá)量時(shí)，最好選用 GAPDH作為內(nèi)參，因?yàn)镚APDH是代謝類蛋白，在活組織中表達(dá)比較恒定。而β-Actin和β-Tubulin是結(jié)構(gòu)蛋白，不同組織的細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)有差異性；
●而在某些細(xì)胞中，由于組織缺氧、糖尿病等因素會(huì)導(dǎo)致GAPDH的表達(dá)增高，不適合做內(nèi)參；
●涉及細(xì)胞增殖的相關(guān)試驗(yàn)中，c-Jun由于自身表達(dá)變化不適合做內(nèi)參；
●凋亡實(shí)驗(yàn)時(shí)，TBP、Lamin等也不適合作為內(nèi)參；
●做誘導(dǎo)后樣本或檢測磷酸化等修飾性抗體時(shí)，應(yīng)選擇結(jié)構(gòu)蛋白作為內(nèi)參，如β-Actin 和β-Tubulin；
●做各種分泌液樣本的時(shí)候，如血漿、乳汁、組織液等，由于沒有完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，只能選擇一些分泌蛋白作為內(nèi)參。
內(nèi)參抗體驗(yàn)證示例
