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標(biāo)簽抗體 (Tag Antibody)
標(biāo)簽抗體是指能夠與重組蛋白上的標(biāo)簽 (His、GST、FLAG等)特異性結(jié)合的抗體，可通過標(biāo)簽融合蛋白免疫宿主的方式得到。
標(biāo)簽抗體 (Tag Antibody)可用于檢測和純化各種商品化表達(dá)載體上的標(biāo)簽序列，籍以分析目的蛋白的表達(dá)含量及其功能。其原理是抗原—抗體反應(yīng)，這些標(biāo)簽抗體可以高度特異地結(jié)合對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽融合蛋白。
標(biāo)簽抗體除了識(shí)別和純化蛋白以外，還有許多其它的用途，比如免疫印跡、免疫共沉淀、流式細(xì)胞、免疫熒光檢測等。標(biāo)簽抗體已經(jīng)成為開展基因蛋白表達(dá)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因功能研究的常用工具，在蛋白質(zhì)相互作用、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和蛋白質(zhì)定位研究中發(fā)揮重要作用。
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常用標(biāo)簽類別
常用標(biāo)簽包括：Flag、His、Myc、HA、GST、GFP等。
Flag標(biāo)簽
Flag標(biāo)簽是由八個(gè)親水氨基酸構(gòu)成的一段寡肽(DYKDDDDK)。由于Flag標(biāo)簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。
His標(biāo)簽
His標(biāo)簽由人工合成的組氨酸首尾相連構(gòu)成，通常由6個(gè)氨基酸(HHHHHH)組成，也有3個(gè)和8個(gè)的情況。另外，也存在一種由19個(gè)組氨酸構(gòu)成的天然多聚組氨酸標(biāo)簽(HAT-tag)。由于分子量較小，且較容易分離和純化，是目前使用最廣泛的一種。Myc標(biāo)簽
Myc標(biāo)簽(序列為：EQKLISEEDL)可用于檢測重組蛋白在細(xì)菌、酵母、昆蟲細(xì)胞和哺乳細(xì)胞中的表達(dá)情況。Myc重組蛋白質(zhì)可通過偶聯(lián)Myc標(biāo)簽抗體到二乙烯砜活化的瓊脂糖上而進(jìn)行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會(huì)降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標(biāo)簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測但很少用于純化。HA標(biāo)簽
HA融合蛋白也是一種小肽，由9個(gè)氨基酸組成(YPYDVPDYA)，其來源于流感病毒的紅細(xì)胞凝集素表面抗原決定簇。對(duì)外源目的蛋白的空間結(jié)構(gòu)影響較小，容易構(gòu)建成標(biāo)簽蛋白融合到N端或者C端。易于用抗HA抗體檢測和ELISA檢測。
GST標(biāo)簽
GST具有解毒作用，可將谷胱甘肽中的硫基轉(zhuǎn)移至含硝基或鹵化物的復(fù)合物中。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細(xì)菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。GFP標(biāo)簽
綠色螢光蛋白(Green Fluorescent Protein)，簡稱GFP，是發(fā)光生物體內(nèi)廣泛存在的一類蛋白質(zhì)，不需要激發(fā)即可發(fā)出一定波長的熒光。GFP或其突變體EGFP等被廣泛用于基因表達(dá)效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達(dá)用于檢測目的蛋白的表達(dá)和分布。一般來說，GFP抗體不僅可以檢測GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以分析GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量分析GFP融合蛋白等。
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