工作原理
蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)研究的基礎(chǔ)工作之一。BCA (bicinchoninic acid)是理想的蛋白質(zhì)定量方法，是當(dāng)前比Lowry法更優(yōu)越的專(zhuān)用于檢測(cè)總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。
BCA Protein Assay Kit?是一種用于蛋白質(zhì)濃度測(cè)定的試劑盒，它基于BCA（Bicinchoninic Acid）法進(jìn)行蛋白質(zhì)定量分析。蛋白質(zhì)在堿性條件下，將 Cu 2+還原為 Cu +，Cu +與 BCA 試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，該復(fù)合物的顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，從而可以通過(guò)測(cè)量其在562nm處的吸光度來(lái)確定蛋白質(zhì)的濃度。該方法快速靈敏、穩(wěn)定可靠，不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，對(duì)不同種類(lèi)蛋白質(zhì)檢測(cè)的變異系數(shù)非常小。BCA 蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高、靈敏度高和兼容性高的特點(diǎn)。
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
準(zhǔn)確靈敏，線性范圍廣：BCA 試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是 10-2000μg/mL。
快速：45 分鐘內(nèi)完成測(cè)定，比經(jīng)典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。
經(jīng)濟(jì)實(shí)用：在微孔板中進(jìn)行測(cè)定，可大大節(jié)約樣品和試劑用量。
效果穩(wěn)定：不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響，檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)。
使用說(shuō)明
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按體積比A : B (50：1)配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10微升標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100ul（標(biāo)準(zhǔn)品一般可用PBS稀釋?zhuān)?，使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加PBS補(bǔ)足到20ul。
3. 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，補(bǔ)加PBS到20ul。
4. 各孔加入200ul BCA工作液，37℃放置30分鐘。
5. 冷卻到室溫，用酶標(biāo)儀562nm測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。
注意事項(xiàng)
1. 在低溫條件或長(zhǎng)期保存出現(xiàn)沉淀時(shí)，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。
2. 樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類(lèi)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，請(qǐng)?jiān)囉肂radford蛋白濃度測(cè)定試劑盒；高濃度的去垢劑也影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可用TCA沉淀去除干擾物質(zhì)。
3. 要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果，每個(gè)蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4. 當(dāng)試劑A和B混合時(shí)可能會(huì)有渾濁，但混勻后就會(huì)消失，工作液在密閉情況下可保存1周。
5. 需準(zhǔn)備37℃水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計(jì)，測(cè)定波長(zhǎng)為540-595nm之間，562nm最佳。酶標(biāo)儀需與96孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，試劑盒測(cè)定的樣品數(shù)量會(huì)因此而減少。使用溫箱孵育時(shí)，應(yīng)注意防止因水粉蒸發(fā)影響檢測(cè)結(jié)果。
文獻(xiàn)引用精選
